FISH技术中,PNA探针如何提高检测灵敏性?
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发布时间：2024-10-24 12:55
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时间：2024-11-14 10:52
FISH技术，尤其是用于种属鉴定时，最常依赖的靶序列是16S rRNA。通过设计具有种属特异性的寡核苷酸探针，进行精确的检测。
（1）寡核苷酸探针FISH技术利用的探针通常长度在15-30 bp之间，尽管短小便于与目标序列结合，但标记却是一个挑战。探针标记方法包括直接标记和间接标记，以确保信号的有效传递。
（2）相较于传统的DNA，核酸肽（PNA）作为一种新型工具，其独特的设计提供了更强的专一性和热稳定性。PNA探针，如15 bp长度，因其结构特点，能精确地定位到rRNA的高级结构域，显著提高了检测的灵敏度。
（3）在更先进的FISH技术中，多彩FISH的出现允许同时检测多个靶序列，通过采用不同染色的标记探针和荧光染料。在应用多彩FISH时，关键在于：
A. 选择具有多波峰特性的滤镜，以优化信号分析。
B. 混合荧光染料需具有窄的散射峰，以防止光谱重叠，避免背景噪音和染料褪色问题。
C. 对于低丰度靶序列的检测，应选用光稳定且亮度高的染料，以提高检测的准确性。
扩展资料
鱼类属於脊索动物门中的脊椎动物亚门，一般人把脊椎动物分为鱼类（53%）、鸟类（18%）、爬虫类（12%）、哺乳类（9%）、两生类（8%）五大类。根据Nelson（1994年）统计，全球现生种鱼类共有24618种，占已命名脊椎动物一半以上，且新种鱼类不断被发现，平均每年已约150种计，十多年应已增加超过1500种，目前全球已命名的鱼种应在26000种以上。
