高效液相色谱法测定金铃子滴丸中延胡索乙素的含量

世界中西医结合杂志２０１０年第５卷第１０期ｗ　０ｒＩｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　０ｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｄｗｅｓｔｅｍＭｅｄｉｃｉｎｅ　２０１０，Ｖ。１．５，Ｎ。．　・：　！：　药物研究・　高效液相色谱法测定金铃子滴丸中延胡索　乙素的含量　张妍王颖梅耀军　郑平　王文忠　采用ＨＰＬＣ　【摘要】　目的建立测定金铃子滴丸中延胡索乙素含量的高效液相色谱法。方法法测定延胡索乙素含量，色谱柱为依利特ｃ。　（４．６　ｍｍ×２００　ｍｍ，５　ｍ）；流动相为甲醇：０．１％磷酸溶　液（三乙胺调ｐＨ值至６．０）（５５：４５）；检测波长为２８０　ｎｍ，流速为１．０　ｍＬ・ｍｉｎ～，柱温为３０℃，进样　量ｌＯ　。结果延胡索乙素在０．０１～０．２０　ｍｇ・ｍＬ　范围内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，　该测定方法重复性好、灵敏度高并且简便、准确，可作为金铃子滴　相关系数ｒ＝０．９９９　９（ｎ＝７）；平均回收率为１００．２５％，ＲＳＤ为１．７１％（ｎ＝６）；重复性实验的相对标准　偏差ＲＳＤ为１．８７％（ｎ＝６）。结论丸中延胡索乙素含量的测定方法。　【关键词】金铃子滴丸；延胡索乙素；高效液相色谱法　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｕｌｍａｔｉｎｅ　ｉｎ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｔｏｏｓｅｎ—　ｄａｎ　Ｄｒｏｐ　Ｐｉｌｌ　ｗｉｔｈ　ＨＰＬＣ　ＺＨＡＮＧ　Ｙａｎ，ＷＡＮＧ　Ｙｉｎｇ，ＭＥＩ　Ｙａｏ—ｊｕｎ，ＺＨＥＮＧ　Ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｗｅｎ—ｚｈｏｎｇ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ＆Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｃｏｍｍｅｒｃｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１　３４）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ＨＰＬＣ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｕｌ—　ｍａｔｉｎｅ　ｉｎ　ｆｒｕｃｔｕｓ　ｔｏｏｓｅｎｄａｎ　ｄｒｏｐ　ｐｉｌ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐ—　ｕｌｍａｔｉｎｅ，ｗｉｔｈ　Ｅｌｉｔｅ　Ｃｌ８　ｃｏｌｕｍｎ（４．６　ｍｍ×２００　ｍｍ，５　ｍ）ａｎｄ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ，ｍｅｔｈａｎｏｌ：０．１％ｐｈｏｓｐｈｏｉｒｃ　ａｃｉｄ（ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ：６．０）（５５：４５），ａｔ　２８０　ｎｍ；ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ，１．０　ｍＬ・ｍｉｎ～，ａｔ　３０℃ｏｆ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　１９　ｕＬ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｉｎｐｕｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｆｏｒ　ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｕｌｍａｔｉｎｅ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｆｒｏｍ　０．Ｏ１　ｔｏ　０．２０　ｍｇ・ｍＬ～．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｆａｃ—　ｔｏｒ（，）＝０．９９９　９（ｎ＝７）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．２５％ａｎｄ　ＲＳＤ　ｗａｓ　１．７１％（ｎ＝６）．ＲＳＤ　ｏｆ　ｒｅｐｅａｔ—　ａｂｌｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　１．８７％（ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｇｏｏｄ　ｉｎ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｈｉｇｈ　ｉｎ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，　ｓａｍｐｌｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｉｎ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｕｌｍａｔｉｎｅ　ｉｎ　ｆｒｕｃｔｕｓ　ｔｏｏｓｅｎｄａｎ　ｄｒｏｐ　ｐｉｌ１．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｆｒｕｃｔｕｓ　ｔｏｏｓｅｎｄａｎ　ｄｒｏｐ　ｐｉｌｌ；Ｔｅｔｒａｈｙｄｒ０ｐｕｌｍａｌｔｉｎｅ；ＨＰＬＣ　金铃子滴丸处方出自《素问・病机气宜保命　集》中金铃子散，由川楝子、延胡索两味中药组成。　川楝子辛苦寒，行气疏肝、清泄肝火；延胡索辛苦　温，行气活血止痛。两药相配，则气行血畅、肝火得　清、疼痛自止。临床主要用于治疗肝郁化火之胸腹　立了ＨＰＬＣ法测定金铃子滴丸中延胡索乙素含量的　色谱条件并对金铃子滴丸中延胡索乙素的含量进　行了测定，为金铃子滴丸的质量控制研究提供依据。　实验材料　胁肋疼痛及气郁血滞所致诸痛，如消化性溃疡、慢　性胃炎、慢性肝炎、胆囊炎等所致胸胁脘腹疼痛及　１．主要仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００高效液相色谱仪、　ＤＡＤ检测器、四元泵、Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００工作站；Ｂｐ２１１Ｄ　电子分析天平（德国，ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）；ＫＱ２１８型超声清洗　器（昆山市超声仪器有限公司）；ＰＨＢ一２便携式ｐＨ　妇女痛经等…。大量有关研究表明，延胡索乙素除　用于镇痛、镇静、安定外，还是治疗阵发性房颤、快　速型室上性心律失常安全有效的药物，并对顽固性　呃逆、剧烈咳嗽有显著疗效　。本研究通过试验建　计（杭州雷磁分析仪器厂）。　２．试药：金铃子滴丸（自制，批号：２００７１２０７，　２００７１２０８，２００７１２０９）；延胡索乙素对照品（中国药　品生物制品检定所，批号：０７２６—２００２０８）；ＪＩｌ楝子、　作者单位：天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津３００１３４　通讯作者：王文忠，Ｅｍａｉｌ：ｗｗｚ２ｋ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ　醋延胡索（天津市药饮片厂）；９５％食用乙醇（天津　・８６２。　世界中西医结合杂志２０１０年第５卷第１０期　Ｗ。ｒｌｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ。ｆ　Ｉｎｔ。ｇｒａｔｅｄ＿ｒｒａｄｉｔｉ。ｎａｌ　ａｎｄ　ｗｅｓｆｅｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１０ｖ。１．５，Ｎ。．１０　，市津酒集团）；甲醇为色谱纯；三乙胺、磷酸、丙酮等　份精密加入延胡索乙素对照品溶液（延胡索乙素浓　均为分析纯。　方法和结果　１．色谱条件　：色谱柱：依利特Ｃ　。（４．６　ｍｍ×　２００　ｍｍ，５　ｌｘｍ）；流动相为甲醇：０．１％磷酸溶液（三　乙胺调ｐＨ值至６．０）（５５：４５）；检测波长：２８０　ｔｉｍ；　流速：１．０　ｍＬ－ｒａｉｎ～；柱温：３０℃。　２．对照品溶液的制备：精密称取延胡索乙素对　照品５．Ｏ０　ｍｇ，甲醇溶解后置２５　ｍＬ容量瓶中，加甲　醇至刻度，摇匀，得对照品溶液。精密吸取对照品　溶液０．２５、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０　ｍＬ，分别置５　ｍＬ容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀。得到７　组不同浓度的对照品溶液（浓度分别为０．Ｏ１、０．０２、　０．０４、０．０８、０．１２、０．１６、０．２０　ｍｇ・ｍＬ　）。　３．线性关系考察：按上述色谱条件，分别吸取上　述７组不同浓度的对照品溶液１０　进样，测定峰面　积。以对照品溶液浓度　为横坐标，峰面积Ｙ为纵坐　标，绘制标准曲线，建立回归方程为Ｙ＝７　Ｏ１１．１７ｘ一　１５．５７，ｒ＝０．９９９　９，线性范围为０．Ｏｌ～０．２０　ｍｇ　・ｍＬ～。　４．样品测试液的制备：取金铃子滴丸研细，精密　称取０．３　ｇ，置具塞锥形瓶中，加甲醇２０　ｍＬ，超声处　理２０　ｍｉｎ，移人２５　ｍＬ容量瓶中用甲醇定容，摇匀，　过０．４５　ｍ微孔滤膜即得。　５．精密度实验：精密吸取某一样品测试液１０　Ｌ进样，连续重复５次，计算延胡索乙素峰面积积　分值的ＲＳＤ为０．８２％。　６．稳定性试验：分别精密吸取某一样品测试液　１０　，于０、４、１２、２４　ｈ不同时间间隔进样，计算延　胡索乙素峰面积积分值的ＲＳＤ为１．２６％。　７．阴性对照试验：取阴性对照样品（处方中缺　延胡索药材），按样品测定液制备方法制备阴性对　照测试液，取１Ｏ　进样测定。结果其色谱在延胡　索乙素相应保留时间无峰出现，说明处方中其他成　分对测定结果无干扰。　８．重复性试验：精密称取同一批号的滴丸细粉　０．３　ｇ（共称６份），按样品测试液制备方法制得６份　测试液，分别吸取１０　Ｌ进样，计算延胡索乙素含量　的ＲＳＤ为１．８７％。　９．加样回收率试验：精密称取已知延胡索乙素　含量的同一批号的滴丸细粉６份（每份０．３　ｇ），每　度：０．５０５　ｍｇ・ｍＬ　）２　ｍＬ，按样品测试液制备方法　制备其测试液，ｌ０　Ｌ进样测定，计算回收率。结果　见表１。　表１加样回收率　１０．样品含量测定：取３批滴丸样品，研细混匀，　每批称取３份，每份０．３　ｇ，精密称定，按样品测试液　的制备方法制备测试液，１０　进样，测定峰面积积　分值，计算延胡索乙素含量。结果见表２。　表２样品含量　讨　论　高效液相色谱法测定滴丸中延胡索乙素含量　时，参考文献［３］，采用甲醇：０．１％磷酸溶液（三乙　胺调ｐＨ值至６．０）（５５：４５）为流动相，其色谱峰的　分离效果较好，延胡索乙素的保留时间约为１２　ｒａｉｎ　左右。该方法重复性好、灵敏度高并且准确、简便，　可用于金铃子滴丸中延胡索乙素含量的测定。　参考文献　［１］王建．中医药学概论［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００７：３０１．　［２］徐婷，曹惠明，金昔陆．延胡索乙素临床应用的研究进展［Ｊ］．上　海中医药大学学报，２０００，１４（４）：６０—６３．　［３］国家药典委员会．ＺＢＢＺＨ／ＺＹ／１中华人民共和国药典［Ｓ］．北京：　化学工业出版社，２００５：９４．　（收稿日期：２０１０—０６—１９）